Efeitos da fosforilação do transportador vesicular de acetilcolina em seu tráfego e localização em células PC12

Resumo

O transportador vesicular de acetilcolina (VAChT) participa efetivamente da neurotransmissão colinérgica. Estudos realizados em células PC12 mostraram que a serina 480 é o sítio de fosforilação do VAChT. Experimentos demostraram que a proteína quinase C (PKC) é a quinase envolvida na fosforilação do VAChT e que a substituição da serina 480 por glutamato – que imita o evento da fosforilação - aumenta a expressão do VAChT em LCDVs (vesículas maiores onde normalmente se encontram os transportadores de monoaminas ou VMATs). Para verificar se a fosforilação do VAChT altera seu tráfego em células PC12, foram feitos dois mutantes do VAChT. No primeiro, foi substituída a serina 480 (sítio de fosforilação para PKC), por alanina (um aminoácido sem carga, portanto, não pode ser fosforilado), este mutante foi denominado GFP-VAChT S480A. No segundo, a serina foi substituída por glutamato (um aminoácido que imita o estado fosforilado do VAChT), este mutante foi denominado GFP-VAChT S480E. O VAChT foi etiquetado com GFP; uma proteína fluorescente, que permite a visualização do VAChT em células PC12, através de microscopia confocal. O objetivo deste trabalho foi verificar se existem diferenças no tráfego e localização do VAChT no estado fosforilado e não fosforilado em células PC12. O VAChT no estado fosforilado localiza-se em maior concentração nas varicosidades das células (36% mais fluorescência que no corpo celular); local onde a ACh é liberada. Já o VAChT no estado não fosforilado localiza-se em maior concentração no corpo celular (20% mais fluorescência no corpo em relação às varicosidades). Estes resultados indicam que a fosforilação do VAChT afeta seu tráfego, e consequentemente, sua localização em células PC12.